为什么不能让猫狗靠近?
对犬科动物(包括犬属和狐属)的基因多态性研究是近年来分子遗传学领域的热点之一,这些多态性可能涉及到免疫调节、激素分泌、神经系统活动、药物代谢等生理过程,与动物的健康状况和饲养管理相关,也可能受遗传因素和环境因素的影响。其中部分单核苷酸多态性(SNPs)已被证明与动物的生长发育、繁殖、疾病抵抗力等有密切相关,因而有可能成为未来畜禽重要遗传标记的首选来源。 近十年来,随着高通量技术的快速发展,SNP在动物遗传领域得到广泛的应用并显示出巨大的商业价值。与传统基因定位方法相比,SNP具有操作简单、样本要求少、分析效率高、成本低等优点,已在许多物种中得到应用。 目前,可用于实验动物的SNP检测技术主要有实时定量PCR(qRT-PCR)、扩增片段长度多态性(AFLP)、单链构象多态性(SSCP)、基因测序等方法。其中,qRT-PCR是目前最为常用的SNP检测方法,它可在个体水平上直接检测基因组DNA中的SNP,操作简便,灵敏度高,适合大规模遗传研究。
通过比较纯合型和杂合型基因型的SNP多态性,进而推断出动物遗传标记的有无及基因型,从而确定其遗传特性,为下一步的研究提供理论依据。 下面以小鼠常见突变型为例讨论如何利用qRT-PCR技术检测小鼠基因型的SNP。 取约50 mg样品,采用TRIzol试剂提取总RNA。
以总RNA为模板,用OligodT(18)引物逆转录合成cDNA第一链。
合成的第一链cDNA做模板,用FQ_SNP_PCR_Mix和Ratio_Mix进行40个循环的荧光定量PCR,根据熔解曲线判断产物可靠性后取96℃时的CT值,代入SNP计算程序中计算基因型。